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單克隆抗體的詳細制備方法

自Kohler和Milstein建立了淋巴細胞雜交瘤技術后,他們將只針對一種抗原決定簇產生抗體B淋巴細胞和能無限增殖的腫瘤細胞融合雜交,產生既能分泌抗體,又能無限增殖的雜交融合細胞,它所產生的抗體是針對同一抗原決定簇的高度同質的抗體,即單克隆抗體(monoclonal antibody),簡稱單抗。與多抗相比,單抗純度高,專一性強、重復性好、且能持續(xù)地無限量供應。單抗技術的問世,不僅帶來了免疫學領域里的一次革命,而且它在生物醫(yī)學科學的各個領域獲得極廣泛的應用,促進了眾多學科的發(fā)展。

單克隆抗體制備的基本過程如下:

(1)用抗原免疫小鼠;

(2)從抗原免疫過的小鼠獲取脾細胞;

(3)應用細胞雜交技術使骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合,得到雜交瘤細胞。這種細胞不僅能夠像B淋巴細胞一樣合成性質穩(wěn)定的轉移性抗體,而且能夠像骨髓瘤細胞一樣無限復制,這樣就可以產生大量且性質專一的鼠源抗體;

(4)對獲得的雜交瘤細胞進行篩選,選出能分泌高效價抗體的雜交瘤;

(5)對已篩選出的單個細胞進行鑒定和克隆。

雜交瘤產生的單克隆抗體在各個領域中應用越來越廣,有很大的優(yōu)點和潛力。能夠根據(jù)需要進行研發(fā)生產,可建立穩(wěn)定的細胞株持續(xù)供給應用,相比于抗血清能夠減少大量的動物和費用,而且純度高,均一性好,可作為一種標準試劑。

在獲得能分泌高效價抗體的雜交瘤細胞株后,一般有兩種方法來獲得單克隆抗體:小鼠腹腔注射雜交瘤細胞和細胞培養(yǎng)。

(1)小鼠腹水:

將雜交瘤細胞接種到小鼠的腹腔,雜交瘤在腹腔內增殖,取得腹水進行純化即可得到抗體。此法易于操作,重復性高,且花費少,得到的抗體量多,但傷害動物,而且當需要大規(guī)模制備抗體時需要大量動物。

(2)細胞培養(yǎng):

將雜交瘤細胞進行培養(yǎng),培養(yǎng)后的上清液中即含有抗體。這種方法適合大規(guī)模生產抗體。但是這種方法獲得的抗體雜質相對較多,因為細胞上清含有培養(yǎng)液,pH指示劑,細胞代謝廢物等。而且培養(yǎng)用的血清中的成分不明確,可能會含有能影響抗體純度的雜蛋白。所以在細胞培養(yǎng)中會逐漸將雜交瘤細胞通過逐步減少血清來馴化到無血清培養(yǎng)。

總之,單克隆抗體的高特異性,重復性使其在生物研究以及醫(yī)藥方向都有良好的應用基礎以及前景。

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