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雙抗夾心法CLIA檢測原理

雙抗夾心化學(xué)發(fā)光法(CLIA)是將雙抗體夾心法與化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)結(jié)合在一起的檢測方法。它的一般實驗步驟包括:將特異性針對待測抗原的抗體包被于 96 孔微孔板中,制成固相載體;向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,使待測抗原與連接于固相載體上的抗體結(jié)合;此后加入生物素化的針對待測抗原的抗體,形成夾心;再將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后,加入 HRP 標(biāo)記的親和素,再次徹底洗滌后加入魯米諾發(fā)光底物,并用光子計數(shù)器,讀出各孔的相對光度值(RLU)。此法與雙抗夾心ELISA法的區(qū)別在于采用了增強(qiáng)型的ECL發(fā)光體系作為發(fā)光底物試劑來實現(xiàn)檢測過程。由于其靈敏度高,檢測范圍跨度大,且不存在放射性污染,該方法被認(rèn)為是最有前途的實驗室診斷方法之一。

原理圖如下: