要制備小分子半抗原的抗體，首先對小分子的結(jié)構(gòu)有一定的要求，需要一定的復雜性或剛性，如含有苯環(huán)、雜環(huán)基團或者有分支結(jié)構(gòu)，否則難以產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生的抗體效價也較低。

一些小分子半抗原若具有活性基團，如-COOH、-NH2、-OH等，可以直接跟載體蛋白進行偶聯(lián)，制備完全的人工抗原（如偶聯(lián)原理圖1）。如果半抗原沒有可直接與載體共價連接的基團，或雖有活性基團但這些基團對維系半抗原的免疫特性和特征結(jié)構(gòu)十分重要，或直接與載體蛋白連接后半抗原的特征結(jié)構(gòu)易受載體的局部微化學環(huán)境或空間位阻的干擾影響機體的免疫反應，則必須要對半抗原小分子重新設(shè)計，合成修飾化的半抗原。

偶聯(lián)原理圖1

由于小分子半抗原活性受多重因素（包括原有分子結(jié)構(gòu)，連接臂，活性基團，空間構(gòu)象）的影響，所以在制備過程中會遇到很多技術(shù)難題，常見的技術(shù)難題有以下幾個方面：

1）抗原連接位點的選擇，不同的位點修飾得到的抗原免疫活性可能會差別很大。

2）抗原連接臂及其長度的選擇，連接臂以及外加的活性基團應該不易誘導機體產(chǎn)生“臂抗體”。

3）小分子半抗原與載體蛋白連接效果的判斷，如結(jié)合比與偶聯(lián)率的判斷。

4）制備成功的人工抗原濃度以及免疫原性強弱的判斷。

5）制備的抗體的特異性以及親和力的問題。

目前，云克隆公司在大量的文獻資料和化合物的背景資料支持下，針對不同目標化合物的官能團和結(jié)構(gòu)特征，設(shè)計合理的結(jié)構(gòu)改造方案，合成修飾化的半抗原，獲得完全的人工抗原，用于多克隆和單克隆抗體的制備。

下面我們簡要介紹下小分子抗原結(jié)構(gòu)修飾的常見方法：

1，琥珀酸酐法將分子結(jié)構(gòu)中帶有羥基的化合物反應修飾成帶羧基；

2，羧甲基羥胺法或?qū)Π被郊姿岱▽Ⅳ驶惖幕衔镄揎棡榱u基；

3，一氯醋酸鈉法或者重氮化法（酸性條件與亞硝酸鈉反應），酚羥基類化合物被修飾為羧基；

4， Mannish法將胺類的化合物修飾成氨基類化合物。

下期專題，我們將介紹常用的載體以及相對應載體的偶聯(lián)方法。

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