瘦素（leptin，LEP）是一種由白色脂肪細胞產生的激素，可通過抑制饑餓來幫助調節(jié)能量平衡。其前體由167個氨基酸組成，在血液中被切除N端信號肽，形成Leptin（16kD）。Leptin最為重要的生物學效應是通過下丘腦含神經肽的神經元和神經肽受體介導的，可抑制食欲，減少能量攝取，增加能量消耗以及抑制脂肪合成。盡管調節(jié)脂肪儲存被認為是Leptin的主要功能，但它也在生長、生殖等生理過程中發(fā)揮作用。除了脂肪細胞和下丘腦細胞，在全身各個組織細胞中都能發(fā)現瘦素受體。瘦素和機體系統(tǒng)的病理生理相關性正逐步被人們了解發(fā)掘。

實驗原理：Hexokinase 3，White Cell（HK3）已被鑒定為LEP的相互作用因子。本實驗通過結合ELISA檢測重組人LEP和重組HK3蛋白的相互作用。

實驗方法：用含有0.01% BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋LEP。將100μL樣品移入HK3蛋白預包被酶標板中，37℃孵育2小時。棄去孔內液體，用PBST洗滌。除去洗液，加入抗LEP-pAb孵育1小時，棄去孔內液體，用PBST洗板3次。用辣根過氧化物酶標記的二抗孵育后，棄去孔內液體，用PBST洗板3次。加入底物溶液后，在37℃下孵育15-25分鐘。最后，向孔中加入50μL終止液，立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度。

實驗結果：LEP和HK3的結合活性如Figure 1所示，結合活性呈劑量依賴性。 

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APA084Hu01 Active Leptin (LEP)