人們普遍認(rèn)為，生育和哺乳能夠降低乳腺癌的長(zhǎng)期風(fēng)險(xiǎn)。目前學(xué)術(shù)界認(rèn)為，生育通過(guò)重塑妊娠期、哺乳期及復(fù)舊期乳腺上皮細(xì)胞分化與生長(zhǎng)通路發(fā)揮保護(hù)作用，從而隨時(shí)間推移降低乳腺組織的惡性轉(zhuǎn)化。值得注意的是，哺乳似乎對(duì)三陰性乳腺癌（TNBC）的風(fēng)險(xiǎn)降低具有更顯著的保護(hù)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)產(chǎn)會(huì)誘導(dǎo)CD8? T細(xì)胞在正常乳腺組織中的積聚，其中包括具有組織駐留記憶樣表型的細(xì)胞。在小鼠模型中，經(jīng)歷妊娠、哺乳及復(fù)舊的過(guò)程，驅(qū)動(dòng)了CD8? T細(xì)胞在乳腺內(nèi)的積累。這一現(xiàn)象伴隨著腫瘤生長(zhǎng)減緩及瘤內(nèi)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)增加，而清除CD8? T細(xì)胞則會(huì)消除這些保護(hù)效應(yīng)。重要的是，這種CD8? T細(xì)胞依賴(lài)性的腫瘤控制作用，僅在完成完整的哺乳及退化復(fù)原周期后才被觀察到。與此一致的是，經(jīng)產(chǎn)女性的原發(fā)性TNBC組織表現(xiàn)出更強(qiáng)的T細(xì)胞浸潤(rùn)和更好的臨床預(yù)后。這些橫跨臨床前模型及逾千份患者樣本的研究結(jié)果，共同揭示了生殖史如何塑造乳腺免疫，確立了CD8? T細(xì)胞作為經(jīng)產(chǎn)相關(guān)保護(hù)關(guān)鍵介導(dǎo)者的地位，并為乳腺癌的預(yù)防和治療新策略提供了依據(jù)。

1. 經(jīng)產(chǎn)與女性正常乳腺組織中T細(xì)胞特征的關(guān)聯(lián)性

為評(píng)估生殖史如何影響正常乳腺組織的免疫狀態(tài)，首先比較了經(jīng)產(chǎn)與未產(chǎn)女性未患癌乳腺組織中CD8? T細(xì)胞的數(shù)量和表型。通過(guò)對(duì)Reed等人整理的四個(gè)數(shù)據(jù)集中的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)與未產(chǎn)女性相比，經(jīng)產(chǎn)女性（≥1次足月妊娠）的CD3?、CD8?以及CD8?織駐留記憶樣T細(xì)胞（T_RM）的比例顯著更高。流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估未患癌健康乳腺組織中的免疫浸潤(rùn)情況，發(fā)現(xiàn)經(jīng)產(chǎn)女性表達(dá)組織駐留典型標(biāo)志物CD69和CD103的T_RM樣細(xì)胞比例顯著高于未產(chǎn)女性。多重?zé)晒饷庖呓M化技術(shù)進(jìn)一步證實(shí)，經(jīng)產(chǎn)女性的乳腺組織中CD69?CD103?CD8? T_RM樣細(xì)胞群數(shù)量顯著高于未產(chǎn)女性，這些細(xì)胞主要定位于上皮內(nèi)或?qū)Ч苤車(chē)?/span>。CD69?CD103?CD8? T細(xì)胞在妊娠后穩(wěn)定維持超過(guò)30年，并且與其CD69?CD103?CD8? T細(xì)胞相比，顯示出更優(yōu)的長(zhǎng)期保留，這與先前觀察到CD103? T_RM樣細(xì)胞隨時(shí)間推移占主導(dǎo)地位的結(jié)果一致。為研究與生產(chǎn)和哺乳相關(guān)的乳腺相關(guān)CD8? T細(xì)胞質(zhì)性差異，在經(jīng)產(chǎn)乳腺T_RM樣細(xì)胞中鑒定出差異表達(dá)基因，包括上調(diào)的ITGAE、ITGA1和CXCR6等，稱(chēng)之為“經(jīng)產(chǎn)乳腺相關(guān)（PB）-T_RM特征”。對(duì)包含109例未患癌女性正常乳腺組織樣本的獨(dú)立數(shù)據(jù)集分析顯示，與未產(chǎn)女性相比，經(jīng)產(chǎn)女性組織中該特征信號(hào)呈現(xiàn)顯著陽(yáng)性富集，這證實(shí)了生育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄差異。

圖1. 經(jīng)產(chǎn)與女性正常乳腺組織中T細(xì)胞特征的關(guān)聯(lián)性

（圖片源于《Nature》）

2. 哺乳與復(fù)舊促進(jìn)健康小鼠乳腺脂肪墊中CD8? T細(xì)胞的增加

隨后研究不同品系（C57BL/6和BALB/c）小鼠在妊娠、哺乳及復(fù)舊階段乳腺脂肪墊（MFP）的免疫細(xì)胞群，設(shè)置三個(gè)實(shí)驗(yàn)組：（i）完整自然哺乳周期（21天）后離乳，在乳腺恢復(fù)至孕前狀態(tài)時(shí)（復(fù)舊后第28天，d28-inv）；（ii）早期強(qiáng)制離乳（FW）復(fù)舊，幼鼠在出生12-24小時(shí)內(nèi)移除以實(shí)現(xiàn)最低限度哺乳，在復(fù)舊后第10天（d10-FW）；（iii）與經(jīng)產(chǎn)鼠年齡匹配的未生育對(duì)照組（virgin），發(fā)現(xiàn)d28-inv組CD45⁺細(xì)胞總數(shù)、CD8⁺ T細(xì)胞總數(shù)（包括表達(dá)CD69⁺CD103^-和CD69⁺CD103⁺的CD8⁺ T細(xì)胞亞群）、CD45⁺細(xì)胞群中CD44^hiCD8⁺ T細(xì)胞數(shù)明顯高于virgin組。為進(jìn)一步表征生產(chǎn)相關(guān)CD8⁺ T細(xì)胞，我們進(jìn)行了高維蛋白質(zhì)組學(xué)分析。結(jié)果顯示與virgin組相比，d28-inv組有三個(gè)細(xì)胞簇顯著富集，這三個(gè)細(xì)胞簇均表達(dá)CD69、CD103、CD49a等經(jīng)典組織駐留標(biāo)記物。

圖2. 哺乳與復(fù)舊促進(jìn)健康小鼠乳腺脂肪墊中CD8? T細(xì)胞的增加

（圖片源于《Nature》）

3. 哺乳與復(fù)舊抑制小鼠乳腺腫瘤生長(zhǎng)

為深入探究復(fù)舊不同階段對(duì)腫瘤進(jìn)展的影響，使用TNBC原位癌小鼠模型，對(duì)比分析d28-inv、d10-FW小鼠MFP的腫瘤生長(zhǎng)情況，并以同齡virgin小鼠作為對(duì)照。結(jié)果顯示，d10-FW組小鼠的腫瘤生長(zhǎng)與對(duì)照組無(wú)差異；而d28-inv組小鼠的腫瘤生長(zhǎng)則顯著減緩。同時(shí)發(fā)現(xiàn)d28-inv組腫瘤中CD8⁺ T細(xì)胞數(shù)量顯著增加，包括CD69⁺CD103⁺組織駐留T_RM細(xì)胞群，單核細(xì)胞、CD4⁺ Th1細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞及XCR1⁺ I型樹(shù)突狀細(xì)胞也有所增加。

圖3. 哺乳與復(fù)舊抑制小鼠乳腺腫瘤生長(zhǎng)

（圖片源于《Nature》）

4. 經(jīng)產(chǎn)誘導(dǎo)的腫瘤保護(hù)由CD8⁺ T細(xì)胞介導(dǎo)

為探究經(jīng)產(chǎn)小鼠腫瘤生長(zhǎng)減緩是否由T細(xì)胞介導(dǎo)，我們?cè)谌狈?/span>NK細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞的RAG2^?/?γc^?/?小鼠模型中，對(duì)virgin組和d28-inv組小鼠接種AT3-OVA腫瘤細(xì)胞，結(jié)果顯示兩組腫瘤生長(zhǎng)無(wú)顯著差異。為驗(yàn)證CD8? T細(xì)胞能否重建保護(hù)效應(yīng)，以上兩組小鼠分別輸注源自OT-I轉(zhuǎn)基因小鼠的初始CD8? T細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)d28-inv組腫瘤生長(zhǎng)顯著被抑制，且d28-inv組腫瘤內(nèi)CD45?及TCR-vα2?CD8? T細(xì)胞數(shù)量較virgin組升高。進(jìn)一步驗(yàn)證CD8? T細(xì)胞在經(jīng)產(chǎn)介導(dǎo)保護(hù)中的必要性，通過(guò)抗體清除CD8α?、CD8β?或CD4? T細(xì)胞發(fā)現(xiàn)：?jiǎn)为?dú)清除CD8α或CD8β均能顯著削弱d28-inv組的抗腫瘤保護(hù)，證明CD8αβ? T細(xì)胞是關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞。為評(píng)估局部CD8? T細(xì)胞是否足以控制腫瘤，研究人員使用S1PR1激動(dòng)劑——FTY720阻斷T細(xì)胞向外周遷移，經(jīng)FTY720處理的d28-inv組小鼠喪失腫瘤保護(hù)能力，且腫瘤特異性CD8? T細(xì)胞減少。以上數(shù)據(jù)說(shuō)明，經(jīng)產(chǎn)誘導(dǎo)的腫瘤保護(hù)由CD8αβ? T細(xì)胞介導(dǎo)，哺乳及復(fù)舊期后，腫瘤攻擊可同時(shí)驅(qū)動(dòng)乳腺駐留T細(xì)胞擴(kuò)增與循環(huán)腫瘤特異性效應(yīng)細(xì)胞招募，從而增強(qiáng)免疫監(jiān)視與腫瘤清除能力。

圖4. 經(jīng)產(chǎn)誘導(dǎo)的腫瘤保護(hù)由CD8⁺ T細(xì)胞介導(dǎo)

（圖片源于《Nature》）

5. 母乳喂養(yǎng)與TNBC的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)

在證實(shí)小鼠哺乳及復(fù)舊后腫瘤生長(zhǎng)減緩依賴(lài)于CD8⁺ T細(xì)胞的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究在人類(lèi)TNBC中是否存在類(lèi)似關(guān)聯(lián)。研究團(tuán)隊(duì)分析了包含934名早期乳腺癌女性的馬來(lái)西亞MyBrCa隊(duì)列，發(fā)現(xiàn)經(jīng)產(chǎn)且母乳喂養(yǎng)過(guò)的女性，其TNBC腫瘤的免疫浸潤(rùn)評(píng)分顯著高于未生育或未母乳喂養(yǎng)的患者；且之前發(fā)現(xiàn)的PB-T_RM特征基因在這些腫瘤中也高度富集，凸顯了PB-T_RM特征對(duì)生育和復(fù)舊的特異性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，有過(guò)哺乳經(jīng)歷的經(jīng)產(chǎn)女性腫瘤內(nèi)CD8⁺ T細(xì)胞密度顯著高于未生育女性。另外比較了擁有哺乳史和生存結(jié)局?jǐn)?shù)據(jù)的270名澳大利亞女性的獨(dú)立隊(duì)列，發(fā)現(xiàn)哺乳患者的乳腺癌確診后總生存期顯著長(zhǎng)于未哺乳患者，HE染色分析發(fā)現(xiàn)哺乳時(shí)長(zhǎng)最長(zhǎng)的個(gè)體腫瘤淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量最多。確診乳腺癌后的總體生存期比未母乳喂養(yǎng)的患者延長(zhǎng)近60%（風(fēng)險(xiǎn)比HR=0.39，95% CI：0.19-0.79）。數(shù)字病理分析顯示，母乳喂養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，腫瘤中的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)量越多。

圖5. 母乳喂養(yǎng)與TNBC的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)

云克隆開(kāi)發(fā)了涉及上述研究相關(guān)靶標(biāo)的蛋白、抗體以及試劑盒產(chǎn)品，靶標(biāo)及核心貨號(hào)如下，供參考：