多因子檢測技術(shù)因其“一次實驗，多重數(shù)據(jù)”的高效性，正迅速成為生命科學(xué)研究的熱門工具。然而，許多研究者，尤其是首次接觸的用戶，在試劑盒選擇、實驗操作和數(shù)據(jù)分析等環(huán)節(jié)常常面臨諸多困惑。

基于我們與大量用戶的深入溝通，本文將我們最常被問及的核心技術(shù)問題、操作疑難及解決方案整理了出來。無論您是正在為選購試劑盒做前期調(diào)研，還是實驗過程中遇到了瓶頸，希望這份FAQ對您的研究能有所幫助。

一、兩類多因子檢測試劑盒該如何選？

云克隆有配套Luminex磁珠和配套CBA（Cytometric Bead Array）微球的試劑盒，客戶可以根據(jù)實驗室儀器類型來選擇合適的試劑盒。

Luminex法的多因子試劑盒適用儀器：Luminex MAGPIX?、Luminex 100/200?、FLEXMAP 3D、xMAP INTELLIFLEX?、Bio-Rad? Bio-Plex?（建議儀器使用前提前預(yù)熱，并做好自檢和校準(zhǔn)）。

CBA法的多因子試劑盒適用儀器：NovoCyte D2060R、Navios、FACSMelody、Gallios、DxFLEX、CytoFLEX S等（建議儀器使用前提前預(yù)熱，并做好自檢和校準(zhǔn)。流式細(xì)胞儀僅需要APC，PE雙通道就可以同時檢測27個靶標(biāo)，27個以上靶標(biāo)需要用到APC、APC-Cy7、PE三個通道）。

二、多個靶標(biāo)是否可以用一個試劑盒同時進(jìn)行檢測？

需要根據(jù)靶標(biāo)的方法學(xué)適用性、稀釋倍數(shù)匹配度及交叉反應(yīng)驗證結(jié)果，綜合評估是否適合進(jìn)行組合檢測。

若所有待測靶標(biāo)均適用雙抗夾心法或均適用競爭抑制法，則理論上可組合至同一試劑盒中進(jìn)行檢測。

在云克隆試劑盒的檢測體系中，若同一樣本類型下各靶標(biāo)所推薦的稀釋倍數(shù)差異較小，則可考慮組合至同一試劑盒；反之，若稀釋倍數(shù)差異過大，則通常不建議進(jìn)行組合。

若不同靶標(biāo)之間的序列或結(jié)構(gòu)相似度較高，且經(jīng)實驗驗證存在交叉反應(yīng)，則此類靶標(biāo)不適宜組合至同一試劑盒中，以避免相互干擾導(dǎo)致檢測結(jié)果失真。

三、多因子檢測試劑盒的保存和有效期。

1. 多因子檢測試劑盒該如何保存？未開封的試劑盒是否可以整個放在-20度進(jìn)行保存？

未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。收到試劑盒后請盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、檢測溶液A、檢測稀釋液A保存于-20度，其余試劑請置于4度保存?zhèn)溆?。預(yù)混合磁珠和檢測溶液B需避光保存。

請注意：未開封的試劑盒不能整個放在-20度進(jìn)行保存，因為磁珠和檢測溶液B不建議-20度保存,會影響試劑的性能。

使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存。

2. 多因子檢測試劑盒的有效期是多久？

有效期為1年。

四、多因子檢測試劑盒中檢測試劑相關(guān)問題？

1. 試劑盒試劑中是否含有乙醇或其他表面活性劑？

試劑盒試劑不含有乙醇或其他表面活性劑。

2. Luminex中磁性微球是什么材質(zhì)？

磁性微球核心是氧化鐵，覆蓋有羧基材料和其他塑料成分。磁性微球用熒光染色法進(jìn)行編碼，通過調(diào)節(jié)兩種熒光染料的不同配比來獲得多達(dá)100種不同的磁性微球。

3. 基于Luminex的多因子試劑盒中的磁性微球和其他公司的luminex磁性微球是否通用？

基于luminex方法的多因子試劑盒中的luminex磁性微球與其他公司的luminex磁性微球是一樣的，但由于偶聯(lián)技術(shù)及實驗所使用的抗體對的差異，不建議不同試劑盒的微球和試劑混用。

五、多因子檢測試劑盒檢測樣本相關(guān)問題？

1. 多因子檢測試劑盒適用的樣本類型包括哪些？

常見樣本類型：血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清和其它生物液體(腦脊液、肺泡灌洗液、唾液等)。

有些客戶的樣本類型為全血樣本，這類樣本不適用于Luminex磁珠，因為實驗過程中微球容易丟失。但可以嘗試用流式細(xì)胞儀檢測適配的大顆粒微球。

2. 一盒多因子檢測試劑盒能測多少例樣本？

一個試劑盒有96 test，每組標(biāo)曲使用7 test。所以，有89孔可用于樣本檢測。而實驗是否安排預(yù)實驗和復(fù)孔會進(jìn)一步改變可檢測的樣本數(shù)量。

3. 需要的樣本量是多少？

雙抗夾心法檢測試劑盒每孔需要上樣100μL；競爭抑制法檢測試劑盒每孔需要上樣50μL。云克隆多因子檢測試劑盒通常建議對樣本進(jìn)行至少2倍稀釋后上樣，因此實際所需樣本量相應(yīng)減半：雙抗夾心法每孔最多需樣本50μL，競爭抑制法每孔最多需樣本25μL。

不同試劑盒推薦的樣本稀釋倍數(shù)不同，所以需要的樣本量也會隨之變化。

六、其他常見問題？

1. 標(biāo)準(zhǔn)品和樣本是否需要做復(fù)孔？

主要取決于客戶的選擇。多因子檢測試劑盒的檢測，每個樣本孔單個靶標(biāo)會測定50-100個微球的信號取中位值，所以在檢測準(zhǔn)確性和客觀性上是很好的，一般無需設(shè)置復(fù)孔，但客戶如關(guān)心偶然的操作誤差，也可以考慮對標(biāo)準(zhǔn)品和樣本設(shè)置復(fù)孔。

2. 多因子檢測試劑盒檢測范圍和靈敏度。

多因子檢測試劑盒分為單因子和多因子試劑盒。單因子試劑盒檢測范圍和靈敏度可參考官網(wǎng)產(chǎn)品頁面信息。多因子試劑盒屬于定制產(chǎn)品，需要制備后才有準(zhǔn)確信息。而根據(jù)經(jīng)驗，多因子試劑盒的檢測范圍大多數(shù)和單因子的一樣。如果客戶對于檢測范圍和靈敏度有要求，我們可以在研發(fā)中進(jìn)行調(diào)整，請訂購前和我們溝通。

3. 多因子試劑盒各種性能如何驗證？

穩(wěn)定性：37℃破壞性實驗。

批次差異：出貨前我們會安排驗證，確保批內(nèi)差和批間差都小于10%。

特異性：單因子試劑盒會驗證結(jié)構(gòu)和功能類似物，多因子試劑盒會驗證組合間的各因子間是否存在干擾。

4. 客戶收集的是臨床樣本，每次收樣后需要立即檢測。如果客戶每次的樣本只有5-7例，客戶想要分多次做實驗，可以訂購時加訂標(biāo)準(zhǔn)品嗎？是不是在效期內(nèi)做多次實驗不會影響檢測結(jié)果呢？

可以加訂標(biāo)準(zhǔn)品，在效期內(nèi)做多次實驗不會影響檢測結(jié)果。

5. 結(jié)果分析——標(biāo)曲擬合和樣本測算方法

常用的擬合方式有兩種：

1）濃度和MFI取雙對數(shù)后，二次函數(shù)擬合；

2）濃度和MFI取雙對數(shù)后，四參數(shù)擬合。

6. 實驗中發(fā)現(xiàn)磁力架不匹配怎么辦？

可以用和磁力架匹配的酶標(biāo)板來替代試劑盒中的酶標(biāo)板，如果需要，也可以將型號發(fā)給我們確認(rèn)。

7. 代測樣本需要怎么寄送？

有條件用干冰，若無干冰，也可使用冰袋，盡量保持低溫運輸。

8. 代測的樣本建議放在什么樣本管中？

建議用尖底的EP管裝樣品，0.5mL的EP管最好，用1.5或2mL甚至更大的EP管裝液體樣本送樣會增加取樣損耗，同時樣本蒸發(fā)和管壁粘附也會導(dǎo)致樣品損失，所以寄送時需要算上10%的損耗。