微載體培養(yǎng)技術(shù)是一種細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，通過(guò)攪拌培養(yǎng)液，使微載體懸浮，促使細(xì)胞在微載體表面增殖并成單層分布。微載體是指直徑為60-250μm的微球，具有無(wú)毒性，密度均一等特點(diǎn)，可用于貼壁依賴(lài)性細(xì)胞貼附在微球表面單層生長(zhǎng)，有效地?cái)U(kuò)增了細(xì)胞貼附面積，有利于大規(guī)模細(xì)胞的培養(yǎng)，常被用于生產(chǎn)疫苗，基因工程藥物等。利用傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方案，如腹腔培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)，無(wú)法滿足工業(yè)級(jí)客戶的抗體需求量（克級(jí)）。云克隆利用成熟的微載體培養(yǎng)技術(shù)和生物反應(yīng)器系統(tǒng)，通過(guò)不斷加入新鮮培養(yǎng)基并不斷抽走含細(xì)胞代謝廢物的消耗培養(yǎng)基，使雜......

抗體制備技術(shù)大體經(jīng)歷3個(gè)發(fā)展階段。第一階段：利用高等脊椎動(dòng)物制備抗血清即多克隆抗體制備技術(shù)；第二階段：借助小鼠骨髓瘤細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)以及細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展建立起來(lái)的小鼠單抗制備技術(shù)；第三個(gè)階段：隨著基因測(cè)序以及基因文庫(kù)篩選技術(shù)發(fā)展起來(lái)的重組抗體制備技術(shù)。第一階段的多克隆制備技術(shù)通常不具有大規(guī)模制備抗體的潛力，而且制備的抗體組成成分復(fù)雜，實(shí)用性較差。第二階段的單克隆抗體制備技術(shù)實(shí)質(zhì)上是融合細(xì)胞株構(gòu)建和發(fā)酵工程的綜合應(yīng)用，將抗體的制備從生物體內(nèi)移動(dòng)到發(fā)酵罐中，為抗體的大規(guī)模制備提供了基礎(chǔ)。第三階段的......

雞可以生“金蛋”嗎？似乎雞生金蛋只出現(xiàn)在童話故事中。而云克隆新研發(fā)的雞抗制備技術(shù)，讓母雞“生”出比黃金貴得多的“抗體”蛋?？贵w，作為生命科學(xué)研究中最常用的“示蹤劑”，通常市價(jià)是黃金的100-1000倍。1克黃金的價(jià)格在300元左右，而0.1克抗體的售價(jià)為1000到2000元左右。一只“抗體”蛋蛋黃中含有大約0.3g抗體。這就是云克隆的生“金蛋”雞。抗體的制備最常用的動(dòng)物是兔，但是兔與人、大鼠、小鼠等物種均屬于哺乳類(lèi)動(dòng)物，雖然大部分的蛋白差異是較大的，但是總有一些如“管家基因”編碼的蛋白在各種哺乳動(dòng)物中是極相似的，這些蛋白，由于結(jié)......

借助于病毒顆粒作為基因的載體，利用病毒的侵染特性，自發(fā)的侵染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，將目的基因?qū)氩溉閯?dòng)物細(xì)胞中，以完成目的產(chǎn)物的超量表達(dá)或干涉。該技術(shù)目前在基因、小RNA、轉(zhuǎn)錄因子等功能驗(yàn)證領(lǐng)域以及重組蛋白表達(dá)、轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物制備等領(lǐng)域作為一種主要的技術(shù)手段被廣泛使用。該技術(shù)體系主要由病毒包裝和病毒侵染篩選兩個(gè)部分組成（如圖所示）。病毒包裝就是借助基因工程的方法將目的基因片段與人為改造病毒的基因組通過(guò)特殊的位點(diǎn)連接起來(lái)形成重組病毒基因組以及重組病毒制備的過(guò)程，常規(guī)使用的病毒包裝系統(tǒng)有慢病毒包裝系統(tǒng)和......

為研究蛋白的性質(zhì)、含量、結(jié)構(gòu)與功能，以及為了方便對(duì)抗原抗體特異性結(jié)合的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行觀察和檢測(cè)，通常會(huì)選擇利用一些易測(cè)定又具有高度敏感性的物質(zhì)作為標(biāo)記物標(biāo)記抗原，然后通過(guò)檢測(cè)這些標(biāo)記物的增強(qiáng)放大效應(yīng)而產(chǎn)生的顏色變化、光譜變化等來(lái)達(dá)到研究目的。即利用抗原中氨基酸殘基的特殊理化性質(zhì)，在特定的條件下使蛋白/抗體與標(biāo)記物結(jié)合，形成蛋白/抗體標(biāo)記物。標(biāo)記抗原原理示意圖如下：標(biāo)記蛋白一般可采用酶標(biāo)記、生物素標(biāo)記、熒光標(biāo)記以及C13和N15全蛋白標(biāo)記等方式。標(biāo)記抗體一般可采用酶標(biāo)記、生物素標(biāo)記、熒光標(biāo)記以及膠體金......

染料在生物化學(xué)中最早的應(yīng)用是直接對(duì)切片進(jìn)行染色，然后進(jìn)行觀察。隨著生物技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)以及熒光光譜測(cè)定技術(shù)的不斷發(fā)展，許多染料尤其是熒光染料在細(xì)胞檢測(cè)、腫瘤基因蛋白分析、毒物分析、臨床醫(yī)療診斷等方面得到了廣泛的應(yīng)用。熒光染料泛指吸收某一波長(zhǎng)的光波后能發(fā)射出另一大于吸收光波長(zhǎng)的光波的物質(zhì)。利用熒光染料進(jìn)行抗體標(biāo)記分析在現(xiàn)代生物免疫學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛，并逐步顯示出明顯的優(yōu)越性。下面簡(jiǎn)要介紹應(yīng)用于標(biāo)記抗體的熒光染料及其種類(lèi)：1. 熒光素類(lèi)染料，包括異硫氰酸熒光素(FITC)、 羥基熒光素(FAM)、四氯熒光素(TE......

昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)是四大表達(dá)系統(tǒng)（昆蟲(chóng)細(xì)胞、細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)）之一。昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)原理是通過(guò)轉(zhuǎn)座作用將轉(zhuǎn)移載體中的表達(dá)組件定點(diǎn)轉(zhuǎn)座到能在大腸桿菌中增殖的桿狀病毒穿梭載體（Bacmid）上，通過(guò)抗性和藍(lán)白斑篩選到重組穿梭質(zhì)粒，提取穿梭質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞后，得到的子代病毒即為重組病毒。將病毒上清浸染昆蟲(chóng)細(xì)胞，獲得表達(dá)的重組蛋白。桿狀病毒是一類(lèi)閉合環(huán)狀雙鏈病毒，病毒粒子呈桿狀，以昆蟲(chóng)為主要宿主。桿狀病毒還是一種出芽型分泌性病毒粒子，在感染細(xì)胞后能迅速在培養(yǎng)細(xì)胞中水平傳播而保持細(xì)胞在相......

在上期專(zhuān)題中我們講到小分子半抗原的結(jié)構(gòu)修飾，這期我們將展開(kāi)講述載體蛋白的選擇以及偶聯(lián)方法。載體蛋白是一種自身就能引發(fā)免疫反應(yīng)的大分子，許多不同種類(lèi)的載體蛋白與小分子偶聯(lián)后可制備成完全的抗原。常用的載體包括牛血清白蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白、卵清蛋白、牛甲狀腺球蛋白等。對(duì)于載體蛋白的選擇，主要涉及其溶解性、大小、偶聯(lián)基團(tuán)、免疫原性、成本價(jià)格等因素。目前市面上應(yīng)用最為廣泛的是牛血清白蛋白BSA(三維結(jié)構(gòu)如圖1)，主要是由于BSA化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易變性，分子內(nèi)含有多種氨基，且賴(lài)氨酸含量高，廉價(jià)易得。但BSA由于在一......