小分子半抗原之結(jié)構(gòu)修飾
查看詳情要制備小分子半抗原的抗體，首先對小分子的結(jié)構(gòu)有一定的要求，需要一定的復(fù)雜性或剛性，如含有苯環(huán)、雜環(huán)基團或者有分支結(jié)構(gòu)，否則難以產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生的抗體效價也較低。一些小分子半抗原若具有活性基團，如-COOH、-NH2、-OH等，可以直接跟載體蛋白進行偶聯(lián)，制備完全的人工抗原（如偶聯(lián)原理圖1）。如果半抗原沒有可直接與載體共價連接的基團，或雖有活性基團但這些基團對維系半抗原的免疫特性和特征結(jié)構(gòu)十分重要，或直接與載體蛋白連接后半抗原的特征結(jié)構(gòu)易受載體的局部微化學環(huán)境或空間位阻的干擾影響機體的免疫反應(yīng)，則必須要對......
大腸桿菌無細胞表達系統(tǒng)
查看詳情傳統(tǒng)的大腸桿菌表達系統(tǒng)經(jīng)過不斷的改進優(yōu)化，具有生產(chǎn)周期短、效率高、成本低等一系列的優(yōu)點，但是也存在系統(tǒng)自身的缺陷性，除了無法完成真核蛋白的折疊與修飾外，至今人們利用該系統(tǒng)仍無法解決膜蛋白以及一些毒性蛋白表達，嚴重制約著大腸桿菌表達系統(tǒng)的應(yīng)用。為彌補原核表達系統(tǒng)的不足，人們常用真核表達系統(tǒng)來表達重組蛋白，但是真核表達系統(tǒng)步驟繁瑣、周期長、蛋白產(chǎn)量低、費用高等一系列問題，也給真核表達系統(tǒng)的推廣應(yīng)用設(shè)置了一個比較高的門檻。目前，隨著人們對蛋白表達系統(tǒng)研究的不斷深入，使得蛋白的無細胞表達從可能變成......
ELISA試劑盒精密度性能分析
查看詳情精密度，表示在相同條件下，同一樣本的重復(fù)測定值之間的符合程度，作為檢測系統(tǒng)的基本分析性能之一，是評判檢測系統(tǒng)有效性的評價基礎(chǔ)。那么，如何測定檢測ELISA試劑盒的精密度呢？ELISA試劑盒的精密度分為批內(nèi)精密度和批間精密度。精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV表示。。批內(nèi)精密度：取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測，每份樣本連續(xù)測定20 次，分別計算不同濃度樣本的平均值（Mean）及SD值。計算公式如下：批間精密度：選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重......
CRISPR/Cas9和Argonaute基因編輯技術(shù)簡介
查看詳情隨著科學技術(shù)的發(fā)展，人們對疾病認識的進一步深入，發(fā)現(xiàn)人類很多疾病的發(fā)病原因與基因突變有著密不可分的關(guān)系。那么如何去治療這些疾病呢？人們自然想到了采用一些技術(shù)手段對突變的基因序列進行重新編輯，以期達到治愈的目的，這項技術(shù)就是基因編輯技術(shù)?；蚓庉嫾夹g(shù)經(jīng)過了以歸巢酶，ZFN，TALEN等以蛋白質(zhì)與DNA識別與切割為原理的第一代基因編輯技術(shù)的發(fā)展，人們對基因編輯技術(shù)的認識不斷加深，但是由于第一代基因編輯技術(shù)操作步驟繁瑣、基因編輯效率低下、基因編輯脫靶現(xiàn)象嚴重等問題，很難應(yīng)用于生產(chǎn)實踐。2003年，MIT小組首次利......
磁珠化學發(fā)光雙抗夾心酶免疫測定法檢測原理
查看詳情磁珠化學發(fā)光酶免疫測定，是集磁珠分離技術(shù)，靈敏的化學發(fā)光分析和特異的抗原抗體免疫測值與一體的檢測技術(shù)。其中磁珠化學發(fā)光雙抗夾心酶免疫測定法用酶標記抗體，代測標本中目的抗原，以及磁顆?？贵w形成夾心結(jié)構(gòu)，通過磁場把結(jié)合狀態(tài)（復(fù)合物：酶標記抗體+目的抗原+磁顆?？贵w）和游離狀態(tài)的非目的物以及酶標記抗體分離開，加入發(fā)光底物進行發(fā)光反應(yīng)，通過對發(fā)光強度的檢測進行定量或定性測定。此技術(shù)屬于酶免疫測定的一種。區(qū)別于酶聯(lián)免疫定量檢測試劑盒，最后一步酶反應(yīng)所用的底物為發(fā)光劑，通過發(fā)光反應(yīng)發(fā)出的光在特定的儀器上......
ERK5信號通路
查看詳情前期專題我們介紹了MAPK級聯(lián)激活通路，主要包括細胞外信號調(diào)控的蛋白激酶（ERK）、c- Jun N端激酶（JNK）、P38MAPK以及ERK5 四條途徑，后3條均屬于應(yīng)激激活MAPK通路，其中ERK5通路作為一種非典型的 MAPK 通路，它的發(fā)現(xiàn)是比較晚的，但是研究卻很活躍。ERK5 由 816 個氨基酸構(gòu)成，長度幾乎是其他 MAPK 家族成員的 2 倍。ERK5 的N 末端包含有蛋白激酶區(qū)， C末端有一個獨特的 COOH，這有別于 MAPK 家族的其他成員，如圖1是ERK5的三維結(jié)構(gòu)。ERK5 的級聯(lián)反應(yīng)也是由 3 個相應(yīng)順序激活: 各種刺激因素激活 MEKK2 /3，再由 MEKK2 /3激活MEK5......
酸性 α- 葡萄糖苷酶-龐貝病的診斷金標準
查看詳情酸性α- 葡萄糖苷酶 (Glucosidase Alpha, Acid, GaA)，為淀粉水解酶類的一種。它能催化多糖水解，產(chǎn)生α- D-葡萄糖。同時它也具有轉(zhuǎn)糖苷作用，可將低聚糖中的α-1，4-糖苷鍵轉(zhuǎn)化成α-1，6-糖苷鍵或其他形式的鏈接，從而得到非發(fā)酵性的低聚異麥芽糖或糖酯、糖肽等。當位于第17號染色體上編碼酸性α-葡糖苷酶的基因突變，造成體內(nèi)酸性α- 葡萄糖苷酶缺乏，糖原無法正常代謝，導致體內(nèi)糖原在骨骼肌、心肌和平滑肌等肌肉組織內(nèi)大量集聚，導致嚴重的神經(jīng)肌肉病變。這種溶酶體貯積癥，被稱為龐貝病，也稱為酸性α -葡糖苷酶缺乏癥或II型糖原貯積......
補體C3在血清血漿中的檢測及應(yīng)用
查看詳情補體（Complement）主要分布在人和動物的體液和細胞表面，活化后有生物活性，并可介導免疫和炎癥反應(yīng)的一組蛋白質(zhì)，又稱為補體系統(tǒng)。補體系統(tǒng)由近40種成分組成，大部分都是糖蛋白。補體的固有成分有13類，調(diào)節(jié)蛋白有10類；補體受體10多種。補體不耐熱，當溫度達到56度，時間達到30分鐘時大部分補體會失活。補體不易保存，冷凍干燥，保存時間相對長一些。補體第三組分（Complement Component 3，C3）是補體的核心成分，分子量為195000，由19號染色體C3基因編碼。C3是血液中含量最大的補體成分，主要由巨噬細胞和肝臟合成。C3在補體經(jīng)......