MAPK級聯(lián)激活信號通路
查看詳情絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）是一組能被不同的細胞外刺激，如細胞因子、神經(jīng)遞質(zhì)、激素、細胞應(yīng)激及細胞黏附等激活的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶。MAPK信號通路是利用逐級磷酸化過程將信號放大傳至細胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，調(diào)控相應(yīng)基因的表達，進而引起細胞反應(yīng)的一類重要信號系統(tǒng)。MAPK級聯(lián)激活是多種信號通路的中心，參與到細胞的分裂、分化、凋亡等多種生命過程，且在一些骨關(guān)節(jié)組織炎癥，癌細胞轉(zhuǎn)移等病癥中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。MAPK信號轉(zhuǎn)導是以3 級激酶級聯(lián)激活的方式進行的，如圖所示，首先M......
各種組蛋白的體外檢測及提取技術(shù)
查看詳情組蛋白（histones）是真核細胞核中染色質(zhì)中的強堿性蛋白質(zhì)，是真核生物染色體的基本結(jié)構(gòu)蛋白。組蛋白將DNA進行壓縮并與DNA一起形成核小體，如果沒有組蛋白，染色體DNA解開，形成散亂的很長的DNA鏈。組蛋白的研究具有非常重要的意義。體內(nèi)組蛋白的異常會導致許多疾病，如慢性腎病等。同時有關(guān)組蛋白的修飾與機體免疫調(diào)節(jié)，自身免疫病，腫瘤，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，以及內(nèi)分泌疾病都非常相關(guān)。組蛋白有六種類型：H1、H2A、H2B、H3、H4及古細菌組蛋白，它們富含帶正電荷的堿性氨基酸，而DNA中主要帶負電荷，二者相互作用，使DNA纏繞在組蛋白上......
總蛋白定量方法簡介及優(yōu)缺點
查看詳情蛋白質(zhì)定量是生物學實驗不可缺少的部分，該技術(shù)被廣泛的用于多個領(lǐng)域和行業(yè)，包括生物學科、食品檢驗、臨床檢驗、疾病診斷等。在實際應(yīng)用操作過程中，對樣本中蛋白質(zhì)進行準確可靠的定量分析，是常用且重要的工作。盡管目前有多種總蛋白定量的方法，但是由于蛋白質(zhì)種類繁多，結(jié)構(gòu)復雜，分子量差異大，且功能各異，暫無理想而通用的蛋白質(zhì)定量分析方法。現(xiàn)介紹目前常用的定量方法以及優(yōu)選點，實驗工作者可根據(jù)實驗需要，選取合適的定量方法。蛋白定量法可分為以下兩大類，化學檢測法，包括福林-酚法（Lowry）、二喹啉甲酸法（BCA）、......
一種高效無縫基因拼接技術(shù)
查看詳情隨著PCR技術(shù)的出現(xiàn)，人們逐漸的打開通往研究生命本質(zhì)的大門，這也使PCR技術(shù)成為了上個世紀最為偉大的技術(shù)之一。通過PCR技術(shù)能在體外迅速、大量、靈敏地擴增出目的基因片段，但是需要靈活的改造基因，只有目的基因片段是遠遠不夠的，還需要一種高效的基因加工手段——基因拼接技術(shù)。在實驗操作過程中，無論出于基因改造、載體改造以及將來會出現(xiàn)的物種改造等多種涉及DNA操作的實驗，都不可避免會使用到基因拼接技術(shù)。 1989年Horton等人提出了SOE法（Gene splicing by over lap extension）即通過復制時DNA鏈的交錯延伸來實現(xiàn)基因拼接；......
活化的caspase 3的檢測
查看詳情Caspase (Cysteine aspartic acid specific protease，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶) 是近年發(fā)現(xiàn)的一組存在于細胞質(zhì)中，活化位點均含有半胱氨酸，且特異性斷開天冬氨酸殘基后肽鍵的蛋白酶。Caspase在細胞程序性死亡（又稱凋亡，apoptosis）中起重要作用。迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的人的caspase家族成員已達12種。Caspase 3 是caspase家族的一個重要成員，其在細胞凋亡過程中作為最主要的終末剪切酶行使作用。該蛋白由pro-caspase 3 酶原經(jīng)過進一步的加工而形成，pro-caspase 3 是一個含有277個氨基酸殘基的前體蛋白，對其結(jié)構(gòu)進行分析，可以分......
IN-FUSION一種高效無酶連接技術(shù)
查看詳情在傳統(tǒng)的分子克隆中，我們經(jīng)常通過PCR技術(shù)擴增得到目的基因后，先構(gòu)建T-A克隆載體，將基因在大腸桿菌中進行擴增，然后酶切陽性T-A載體和目標載體，最后進行目的基因和目的載體的連接。這個過程大概需要1-2周來完成，而且具有很大的局限性，主要表現(xiàn)在：1、載體多克隆位點和基因內(nèi)部酶切位點的局限性；2、基因克隆過程中需要添加酶切位點，可能會帶入非特異性擴增；3、對于長片段與目標載體的連接效果差；4、無法實現(xiàn)大規(guī)模載體的構(gòu)建。IN-FUSION技術(shù)主要來源于INFUSION酶的發(fā)現(xiàn)，（如圖）INFUSION酶能夠識別線性化的DNA片段5’......
膠原類的特點以及檢測方法
查看詳情膠原，主要存在于動物結(jié)締組織中的結(jié)構(gòu)蛋白，是哺乳動物中含量最豐富的蛋白質(zhì)，占到了整個體內(nèi)蛋白含量的25-35%。膠原可分為纖維型和非纖維型。最常見的是Type I，Type II，Type III，Type IV，Type V。其中Type I，II，III，V均是纖維型，而Type IV是非纖維型。人體絕大多數(shù)組織器官都含有膠原，目前為止共發(fā)現(xiàn)了28種膠原，而90%以上都是一型膠原。膠原可用于整容外科手術(shù)，骨移植，組織再生，傷口治愈等方面；然而膠原突變會引起各類疾病包括成骨不全癥，軟骨發(fā)育不全，埃勒斯-當洛斯綜合征，遺傳性進行性腎炎，骨質(zhì)疏松癥，Knobl......
單抗還是多抗？多肽還是重組蛋白？
查看詳情我們收到這樣一個定制抗體的訂單詢問，我要定制一個針對小鼠Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG)某一段序列的抗體，這段序列包含35-55位氨基酸，那么我是需要單克隆抗體好還是多克隆抗體好？制備抗體的時候是用多肽作為免疫原好還是用重組蛋白作為免疫原好呢？首先，我們來看看單克隆抗體和多克隆抗體的主要區(qū)別在哪里呢？單克隆抗體是針對單一抗原決定簇，來自單個B淋巴細胞克隆的抗體，多克隆抗體是針對多個抗原決定簇，由多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體。通常來說一個含有多個抗原決定簇的大分子免疫原進入機體后，其不同......